Résumés
Le récepteur P2X7 des cellules endothéliales favorise la maladie veineuse thromboembolique
Estelle. L. Ollivier, Virginie Gourdou-Latyszenok, Francis Courturaud, Catherine A. Lemarié
Inserm, Univ. Brest, CHRU Brest, UMR1304, GETBO, Brest,
France estelle.ollivier@univ-brest.fr
Introduction : La maladie veineuse thromboembolique (MVTE) affecte 117 personnes sur 100 000 chaque année et est une cause importante de morbidité et de mortalité. La MVTE peut entraîner la mort par embolie pulmonaire, le syndrome post-thrombotique ou des séquelles pulmonaires qui altèrent la qualité de vie. Il est maintenant bien connu que des mécanismes inflammatoires sont impliqués dans la physiopathologie de la maladie veineuse thromboembolique. Les cellules endothéliales jouent un rôle essentiel dans la régulation des fonctions immunitaires en réponse aux PAMP et aux DAMP (1). Au cours de l'inflammation, l'adénosine triphosphate (ATP) est libérée dans le compartiment extracellulaire et est reconnue comme un signal de danger par les cellules endothéliales. Des études ont montré que le système CD39/CD73, impliqué dans le métabolisme de l'ATP en AMP, pourrait protéger contre la thrombose veineuse en régulant négativement l'inflammasome NLRP3 (2). L'ATP peut également interagir avec le récepteur P2X7 impliqué dans un large éventail de réponses, notamment l'activation de l'inflammasome NLRP3 et la production d'IL1β (3). Cependant, le rôle du récepteur P2X7 dans la MVTE est inconnu. Objectif : Déterminer comment le récepteur endothélial P2X7 contribue à la maladie veineuse thromboembolique. Matériel et Méthode : Après un prétraitement au TNF⍺, les HUVEC ont été incubées avec du BzATP seul ou avec de la thrombine. Des analyses d'immunofluorescence, de western blot et de PCR quantitative en temps réel ont été utilisées pour étudier l'expression de P2X7 dans les cellules endothéliales, l'activation des voies de signalisation p38 et NFκB et l'expression des gènes, respectivement. Résultats : Nous avons confirmé que les HUVECs exprimaient le P2X7 in vitro et in vivo après induction d'une thrombose veineuse dans un modèle expérimental. Le BzATP et la thrombine ont induit l'activation des voies de signalisation p38 et NFκB. Cela était associé à l'assemblage de l'inflammasome et à l'augmentation de l'expression de l'IL1β. De plus, l'expression d'ICAM-1 et de VCAM-1 a été augmentée, tandis que l'expression de la thrombomoduline a été diminuée. Conclusion : Nos données suggèrent que l'ATP libéré dans l'espace extracellulaire lors de la thrombose veineuse induit l'activation de l'inflammasome dans les cellules endothéliales via l'activation du P2X7. Le P2X7 pourrait avoir un rôle pro-thrombotique exacerbant la maladie veineuse thromboembolique.
Références. 1-. M. Pilard, E.L. Ollivier, V. Gourdou-Latyszenk, F. Couturaud, C.A. Lemarié. Front. Caridiovasc. Med., 2022, 9,864735 2- V. Yadav, L. Chi, R. Zhao, B.E. Tourdot, S. Srilakshmi, B.N. Jacobs, A. Banka, H. Liao, S. Koonse, A.C. Anyanwu, S.H. Visovatti, M.A. Holinstat, J.M. Kahlenberg, J.S. Knight, D.J. Pinsky, Y. Kanthi. J Clin Invest., 2019, 7, 129 3-F. Di Virgilio, D. Dal Ben, A. Clara Sarti, A. L.. Giuliani, S. Falzoni. Immunity, 2017, 1, 47
Influence du cholestérol sur le transport de fer médié par la ferroportine 1 et modulation par des composés amphiphiles
Rim Debbiche a , Chandran Ka a, Isabelle Gourlaouen a, Hélène Couthonb, Wilfried Bertheb, Marco Gomesb, Isabelle Callebautc, Paul-Alain Jaffrèsb, Gerald Le Gaca
a- Université de Bretagne Occidentale, Inserm, Etablissement Français du Sang, UMR1078, GGB Equipe BIGG ; Email : rim.debbiche@univ-brest.fr
b- Université de Bretagne Occidentale, CNRS, UMR6521, CEMCA – Equipe COSM.
c- Sorbonne Université, Muséum National d’Histoire Naturelle, UMR CNRS 7590, Institut de Minéralogie, de Physique des Matériaux et de Cosmochimie, IMPMC
La ferroportine 1 (FPN1) est le seul exportateur de fer connu chez les mammifères. Cette protéine, qui est composée de 12 hélices transmembranaires (TM), joue un rôle essentiel dans l’érythropoïèse en permettant la libération du fer contenu dans différentes cellules de l’organisme au travers de changements conformationnels oscillant entre une structure ouverte vers le cytoplasme (« Inward-Facing ») et une structure ouverte vers la circulation sanguine (« Outward-Facing » ; OF). Différents travaux ont permis d’établir que FPN1 est préférentiellement localisée dans les radeaux lipidiques, des microdomaines de la membrane plasmique particulièrement riches en cholestérol (CHL) [1]. Nous formulons l’hypothèse qu’une interaction directe entre FPN1 et le CHL est nécessaire pour stabiliser le transporteur du fer dans la conformation OF et/ou favoriser certains changements conformationnels. Cette hypothèse s’appuie sur plusieurs résultats préliminaires obtenus au cours de ma thèse. D’abord, des expériences de déplétion/réplétion (CHL/Epicholestérol) ont révélé l’influence directe du CHL sur la fonction d’export du fer de FPN1. Ensuite, des expériences de criblage mutationnel, appuyées par une étude de la structure 3D de FPN1 en conformation OF dans un environnement lipidique simplifié (POPC), ont permis d’identifier trois sites de liaison possibles au CHL (de types CARC/CRAC) localisés dans les hélices TM1 et TM6. Enfin, des molécules dérivées de l’Ohmline, une molécule amphiphile de synthèse [2], ont montré un pouvoir modulateur de la fonction d’export du fer de FPN1. Ces molécules pourraient altérer l’interaction entre FPN1 et le CHL dans les radeaux lipidiques, dont la formation est notamment basée sur le caractère amphiphile du CHL.
Références. 1- Auriac A, et al .Lipid raft-dependent endocytosis: a new route for hepcidin-mediated regulation of ferroportin in macrophages. Haematologica ,2010, 95 : 1269-77. 2- Chantôme et al. Pivotal Role of the Lipid Raft SK3–Orai1 Complex in Human Cancer Cell Migration and Bone Metastases. Cancer Res ,2013, 73 (15): 4852–4861.
Le récepteur V2 de la vasopressine: de la détermination de ses structures 3D jusqu’aux applications thérapeutiques.
Bernard Mouillac
The vasopressin V2 receptor: from 3D structures to therapeutic applications
Résumé: Le récepteur V2 (V2R) de l’arginine-vasopressine (AVP) est un récepteur transmembranaire couplé aux protéines G (RCPGs) typique et un prototype des récepteurs à peptides. Le V2R est exprimé dans le rein où il régule l’équilibre hydrique de notre organisme. C’est une cible thérapeutique majeure. Il est impliqué dans les désordres de la balance hydrique (hyponatrémie par exemple) et les troubles urinaires (incontinence). Il représente aujourd’hui la cible principale du traitement de la polykystose rénale autosomale dominante. De plus, des mutations perte-de-fonction ou provoquant une activité constitutive de ce récepteur sont responsables de 2 maladies génétiques au tableau clinique inversé : le diabète insipide néphrogénique congénital (DINc) caractérisé par une polyurie, ainsi que le syndrome néphrogénique d’antidiurèse inappropriée (SNADI) caractérisé par une charge en eau excessive et une hyponatrémie. Nous avons mis en place des approches de production et de purification du V2R pour déterminer ses structures tridimensionnelles (3D) actives ou inactives en présence de différents ligands (agonistes, antagonistes) et de ses partenaires de signalisation canoniques, la protéine Gs et les beta-arrestines. La comparaison des structures 3D déterminées par cryo-microscopie électronique permet d’apporter des informations moléculaires sur le site de liaison de l’hormone et de ses analogues, le mécanisme d’activation/inhibition du récepteur, l’interface avec les partenaires de signalisation (Bous J et al., Science Advances 2021 (doi: 10.1126/sciadv.abg5628) ; Bous J, Fouillen A et al., 2022 (doi: 10.1126/sciadv.abo7761)). Les structures servent de base au développement rationnel de nouveaux ligands dans un but thérapeutique. En ce qui concerne le V2R, des agonistes, des antagonistes (tels que la toxine mambaquarétine), des agonistes biaisés ou des chaperons pharmacologiques, sont des outils pharmacologiques et potentiellement cliniques importants pour réguler l’activité de ce GPCR impliqué dans une fonction physiologique cruciale et pour traiter des pathologies invalidantes et accablantes pour les patients.